Prosedur kerja feritin

PROSEDUR KERJA FERRITIN

A. PRINSIP

Antibodi dengan high affinity terhadap ferritin (antiferritin Ig G) akan berikatan dengan ferritin serum dan selanjutnya dilabel dengan enzim horseradish peroxidase dan dibaca OD-nya pada panjang gelombang 492 nm.

B. PRA ANALITIK

Alat yang digunakan :

Spuit 3cc

Jarum suntik ukuran 23 G

Kapas dan alkohol

Tabung EDTA

Popet mikro

Microliter plate reader untuk absorbansi 492 nm.

Sentrifuge

Kertas grafik

2. Bahan yang digunakan :

50 ul serum

Preparat antiferitin Ig G

Buffer A, B, C dan D

Larutan substrat

Larutan standar ferritin

C. ANALITIK

1. Melapisi microtiter plate, dengan cara :

a).  Mengencerkan preparat antiferitin Ig G dengan 2 ug/ml buffer C, menambahkan 200ul kedalam tiap-tiap sumuran

b). Menutup dan melakukan inkubasi semalam pada suhu 40 C. Mengosongkan sumuran dengan cara dibalik dan melakukan tapping pada handuk kering.

c). Menambahkan 200 ul 0,05% BSA dalam buffer C, kemudian didiamkan 30 menit dalam suhu ruangan.

d). Mencuci setiap sumuran dengan buffer A tiga kali, kemudian plate dapat disimpan sampai 1 minggu pada tempat kering dan suhu 40C.

2.  Mengencerkan 50ul serum dengan 1 ml buffer B

3. Menambahkan 200 ul larutan standard an serum ke dalam tiap sumuran dalam waktu 20 menit.

4. Menutup dan mendiamkan selama 20 menit pada suhu kamar dan menghindarkan dari sinar matahari.

5. Mengosongkan sumuran dan mencuci tiga kali dengan buffer A.

6.  Menambahkan 200 ul preparat konjugasi antiferitin Ig G dengan horseradish peroxidase yang telah di encerkan, menutup dan mendiamkan selama 2 jam pada suhu kamar.

7. Mencuci tiga kali dengan buffer A

8. Menambahkan 200 ul larutan substrat pada tiap-tiap sumuran, melakukan inkubasi selama 30 menit.

9. Menambahkan 50 ul asam sulfur 4 M pada tiap-tiap sumuran untuk menghentikan reaksi.

10.  Menunggu 30 menit dan membaca absorbansinya pada 492 nm dengan microtiter plate reader, atau mengambil 200 ul larutan dari tiap sumuran dan masukkan dalam 800 ul air, kemudian dibaca dengan fotometer.

D.  PASCA ANALITIK

Pria : 18-270 mcg/L

Wanita : 18-160 mcg/L

Anak-anak : 7-140 mcg/L

Bayi usia 1-5 bulan : 50-200 mcg/L

Bayi baru lahir : 25-200 mcg/L